益生素對(duì)肉雞腸道免疫的促進(jìn)作用

隨著各種作為生長(zhǎng)促進(jìn)劑使用的常規(guī)抗生素的被禁用，家禽生產(chǎn)者越來越擔(dān)心會(huì)失去預(yù)防和治療動(dòng)物疾病并且具有生長(zhǎng)促進(jìn)作用的有效藥物。因此，人們必須找到同樣具有預(yù)防疾病并且能夠促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的抗生素替代物。2001年5月1日至2日，飼料添加劑廠家在專門為飼料生產(chǎn)商舉辦的第48屆馬里蘭營(yíng)養(yǎng)會(huì)議上，馬里蘭大學(xué)畜禽科技學(xué)院的R.A.Dalloul和J.A.Doerr以及美國(guó)農(nóng)業(yè)研究服務(wù)中心的H.S.Lillehoj共同提交了一篇有關(guān)益生素在肉雞生產(chǎn)中應(yīng)用的文章，為人們實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)找到了一個(gè)突破口。 

　　作者指出，以往的研究發(fā)現(xiàn)，日糧處理不當(dāng)對(duì)家禽的腸道免疫可能帶來不良影響。例如，日糧維生素A缺乏時(shí)，家禽腸道黏膜中的細(xì)胞毒性T-細(xì)胞和輔助性T-細(xì)胞的數(shù)量顯著下降（p<0.05）；當(dāng)接種感染劑量的堆形艾美球蟲 (Eimeria acervulina)卵母細(xì)胞時(shí)，感染后6-9天，缺乏組新的卵母細(xì)胞釋放速率幾乎是對(duì)照組的2倍。鑒于此，研究者推斷，如果在日糧中增加一些防護(hù)性物質(zhì)，例如基于乳酸桿菌屬的益生素，通過改善腸道的免疫反應(yīng)，可能對(duì)肉雞的抗病力會(huì)起到增進(jìn)作用。 

　　為了驗(yàn)證這一理論，Dalloul、Lillehoj和Doerr利用以前研究維生素A缺乏癥時(shí)所創(chuàng)造的方法進(jìn)行了試驗(yàn)。

　　1.材料與方法     

　　1日齡肉仔雞層式籠養(yǎng)，每籠8只，每個(gè)處理4籠?；A(chǔ)日糧為玉米豆粕型，處理包括添加益生素（1g/kg）和益生素空白。 

　　21日齡取樣獲得腸道上皮淋巴細(xì)胞（IELs）的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。其余的雞繼續(xù)分組，25日齡進(jìn)行不同處理的試驗(yàn)，處理包括對(duì)照和口服104的堆形艾美球蟲接種，接種后6-9天采集糞樣進(jìn)行卵母細(xì)胞記數(shù)。35日齡（感染后10天）取血樣和腸道樣品。 

　　上皮淋巴細(xì)胞（IELs）測(cè)定遵照Lillehoj（1994）方法進(jìn)行。簡(jiǎn)單概括為，用冰冷的組織培養(yǎng)液沖洗腸道樣品，絞碎后用EDTA進(jìn)行細(xì)胞釋放。 

　　淋巴細(xì)胞用針對(duì)不同的雞的淋巴細(xì)胞亞群的特異抗生素進(jìn)行分離及“染色”。處理后的樣品通過流式細(xì)胞計(jì)數(shù)器統(tǒng)計(jì)淋巴細(xì)胞數(shù)目。血液和腸道中的 E.acervulina抗體水平通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），用多價(jià)的球蟲抗原重組子系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定。另外，γ-干擾素也利用ELISA進(jìn)行測(cè)定。

　　2.結(jié)果與討論     

　　家禽學(xué)家認(rèn)為，腸道粘膜層中淋巴細(xì)胞總的數(shù)量反映機(jī)體局部免疫的存在及得到加強(qiáng)的情況。他們認(rèn)為肉雞從日糧中獲得的益生素增加了其體內(nèi)淋巴細(xì)胞的數(shù)量，從而增強(qiáng)了腸道粘膜層抵抗球蟲侵襲的能力。 

　　本試驗(yàn)中，利用CD4+抗原標(biāo)記輔助性T細(xì)胞，這些輔助性T細(xì)胞能夠攜帶外源性抗原到達(dá)免疫細(xì)胞，并刺激免疫細(xì)胞的增生。試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼喂益生素的試驗(yàn)雞其輔助性T細(xì)胞的數(shù)量較對(duì)照組高（P<0.05）。 

　　他們認(rèn)為，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞能直接殺死侵入宿主的外來細(xì)胞。試驗(yàn)表明，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞在對(duì)照組和益生素處理組腸道粘膜層中的數(shù)量差異顯著（P<0.05）。 

　　因此，Dalloul、Lillehoj和Doerr認(rèn)為，從兩個(gè)方面可以認(rèn)定，飼喂益生素的肉雞自身增強(qiáng)了抵抗球蟲病的能力。首先，飼喂益生素的肉雞有更多的細(xì)胞能夠“發(fā)現(xiàn)”和攜帶球蟲抗原，從而產(chǎn)生特異性抗體；其次，這些雞有大量的細(xì)胞可以直接殺滅球蟲，但是這種直接殺滅球蟲的細(xì)胞不是很多。如果飼喂益生素的雞能很好的在腸道免疫水平抵抗球蟲的侵襲，則其體液免疫反應(yīng)會(huì)降低。 

　　利用ELISA法測(cè)定多價(jià)、綜合球蟲抗原的抗體水平。研究者研究了抵抗E.acervulina球蟲及其他可能類型球蟲抗體的產(chǎn)生情況。他們報(bào)道，對(duì)于對(duì)照組和益生素飼喂組，機(jī)體體液系統(tǒng)的抗體水平?jīng)]有顯著的不同；然而，測(cè)定的腸道粘膜層沖洗物中的抗體水平差異顯著（P<0.05），對(duì)照組抗球蟲抗體水平比益生素飼喂組要高。 

　　另外，他們利用相同的試驗(yàn)研究了機(jī)體內(nèi)的γ-干擾素。結(jié)果顯示對(duì)照組的這種細(xì)胞因子在血清和在腸道粘膜層中數(shù)量都要少于益生素組，但是二者差異不顯著（P>0.05）。 

　　研究者認(rèn)為：血清中強(qiáng)而等效的抗體水平表明了對(duì)照和飼喂益生素組的試驗(yàn)雞都產(chǎn)生了抗球蟲抗體；試驗(yàn)開始時(shí)，機(jī)體獲得的母源抗體不是很高。但是，試驗(yàn)的結(jié)果并沒有特別的得出以上的兩條結(jié)論中的一條。而且益生素飼喂組雞腸道內(nèi)抗體的低水平（P<0.05）表明測(cè)定時(shí)該組雞此時(shí)需要的抗體分泌量比對(duì)照組的低，主要是因?yàn)橐嫔仫曃沟碾u有很強(qiáng)的能力避免發(fā)生抗體反應(yīng)。 

　　如果這種反應(yīng)發(fā)生，那么γ-干擾素的含量將會(huì)比較高，而這種γ-干擾素對(duì)于免疫細(xì)胞的在某一位置的聚集是發(fā)生重要作用的。然而，試驗(yàn)的結(jié)果表明兩試驗(yàn)組之間沒有發(fā)現(xiàn)顯著的不同（P<0.05）。 

　　隨后，在感染后的12天連續(xù)測(cè)定了γ-干擾素的量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)飼喂益生素的雞在感染后大約72h其γ-干擾素達(dá)到高點(diǎn)，并在隨后的9天內(nèi)從這一個(gè)高點(diǎn)直線降低。相反的，對(duì)照組的雞其γ-干擾素卻沒有純粹的變化，表明它們不準(zhǔn)備或不能進(jìn)行有效的免疫反應(yīng)。 

　　Dalloul、Lillehoj和Doerr認(rèn)為：第1個(gè)試驗(yàn)表明了飼喂益生素的雞進(jìn)行了比對(duì)照組的雞更早、更強(qiáng)的抗球蟲的免疫反應(yīng)。因此，體液免疫反應(yīng)沒有什么不同，并且益生素飼喂組的腸道內(nèi)抗體分泌的較低反應(yīng)是與他們最初的假設(shè)相一致的。 

　　通過他們的試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以得出結(jié)論，益生素在禽類生產(chǎn)中可能還有比我們以前想到的還重要的作用。益生素不僅能夠降低胃腸道中的無益微生物的數(shù)量，其在家禽體內(nèi)還具有獨(dú)特的外周效應(yīng)，這使得益生素在家禽工業(yè)中的作用更加突出。他們認(rèn)為，益生素或許能夠提高飼料中關(guān)鍵性營(yíng)養(yǎng)元素的利用效率，進(jìn)而具有廣泛的環(huán)境保護(hù)效益。然而一些家禽學(xué)家認(rèn)為，益生素還可能對(duì)宿主產(chǎn)生一些直接的影響，能夠保存機(jī)體的一些資源，從而在機(jī)體遭受到外來病原菌侵襲時(shí)，能夠產(chǎn)生更為有效的免疫防御作用。