益生素對肉雞腸道免疫的促進作用

隨著各種作為生長促進劑使用的常規(guī)抗生素的被禁用，家禽生產(chǎn)者越來越擔心會失去預(yù)防和治療動物疾病并且具有生長促進作用的有效藥物。因此，人們必須找到同樣具有預(yù)防疾病并且能夠促進動物生長的抗生素替代物。2001年5月1日至2日，飼料添加劑廠家在專門為飼料生產(chǎn)商舉辦的第48屆馬里蘭營養(yǎng)會議上，馬里蘭大學畜禽科技學院的R.A.Dalloul和J.A.Doerr以及美國農(nóng)業(yè)研究服務(wù)中心的H.S.Lillehoj共同提交了一篇有關(guān)益生素在肉雞生產(chǎn)中應(yīng)用的文章，為人們實現(xiàn)上述目標找到了一個突破口。 

　　作者指出，以往的研究發(fā)現(xiàn)，日糧處理不當對家禽的腸道免疫可能帶來不良影響。例如，日糧維生素A缺乏時，家禽腸道黏膜中的細胞毒性T-細胞和輔助性T-細胞的數(shù)量顯著下降（p<0.05）；當接種感染劑量的堆形艾美球蟲 (Eimeria acervulina)卵母細胞時，感染后6-9天，缺乏組新的卵母細胞釋放速率幾乎是對照組的2倍。鑒于此，研究者推斷，如果在日糧中增加一些防護性物質(zhì)，例如基于乳酸桿菌屬的益生素，通過改善腸道的免疫反應(yīng)，可能對肉雞的抗病力會起到增進作用。 

　　為了驗證這一理論，Dalloul、Lillehoj和Doerr利用以前研究維生素A缺乏癥時所創(chuàng)造的方法進行了試驗。

　　1.材料與方法     

　　1日齡肉仔雞層式籠養(yǎng)，每籠8只，每個處理4籠?；A(chǔ)日糧為玉米豆粕型，處理包括添加益生素（1g/kg）和益生素空白。 

　　21日齡取樣獲得腸道上皮淋巴細胞（IELs）的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。其余的雞繼續(xù)分組，25日齡進行不同處理的試驗，處理包括對照和口服104的堆形艾美球蟲接種，接種后6-9天采集糞樣進行卵母細胞記數(shù)。35日齡（感染后10天）取血樣和腸道樣品。 

　　上皮淋巴細胞（IELs）測定遵照Lillehoj（1994）方法進行。簡單概括為，用冰冷的組織培養(yǎng)液沖洗腸道樣品，絞碎后用EDTA進行細胞釋放。 

　　淋巴細胞用針對不同的雞的淋巴細胞亞群的特異抗生素進行分離及“染色”。處理后的樣品通過流式細胞計數(shù)器統(tǒng)計淋巴細胞數(shù)目。血液和腸道中的 E.acervulina抗體水平通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA），用多價的球蟲抗原重組子系統(tǒng)進行測定。另外，γ-干擾素也利用ELISA進行測定。

　　2.結(jié)果與討論     

　　家禽學家認為，腸道粘膜層中淋巴細胞總的數(shù)量反映機體局部免疫的存在及得到加強的情況。他們認為肉雞從日糧中獲得的益生素增加了其體內(nèi)淋巴細胞的數(shù)量，從而增強了腸道粘膜層抵抗球蟲侵襲的能力。 

　　本試驗中，利用CD4+抗原標記輔助性T細胞，這些輔助性T細胞能夠攜帶外源性抗原到達免疫細胞，并刺激免疫細胞的增生。試驗結(jié)果顯示，飼喂益生素的試驗雞其輔助性T細胞的數(shù)量較對照組高（P<0.05）。 

　　他們認為，細胞毒性T淋巴細胞能直接殺死侵入宿主的外來細胞。試驗表明，細胞毒性T淋巴細胞在對照組和益生素處理組腸道粘膜層中的數(shù)量差異顯著（P<0.05）。 

　　因此，Dalloul、Lillehoj和Doerr認為，從兩個方面可以認定，飼喂益生素的肉雞自身增強了抵抗球蟲病的能力。首先，飼喂益生素的肉雞有更多的細胞能夠“發(fā)現(xiàn)”和攜帶球蟲抗原，從而產(chǎn)生特異性抗體；其次，這些雞有大量的細胞可以直接殺滅球蟲，但是這種直接殺滅球蟲的細胞不是很多。如果飼喂益生素的雞能很好的在腸道免疫水平抵抗球蟲的侵襲，則其體液免疫反應(yīng)會降低。 

　　利用ELISA法測定多價、綜合球蟲抗原的抗體水平。研究者研究了抵抗E.acervulina球蟲及其他可能類型球蟲抗體的產(chǎn)生情況。他們報道，對于對照組和益生素飼喂組，機體體液系統(tǒng)的抗體水平?jīng)]有顯著的不同；然而，測定的腸道粘膜層沖洗物中的抗體水平差異顯著（P<0.05），對照組抗球蟲抗體水平比益生素飼喂組要高。 

　　另外，他們利用相同的試驗研究了機體內(nèi)的γ-干擾素。結(jié)果顯示對照組的這種細胞因子在血清和在腸道粘膜層中數(shù)量都要少于益生素組，但是二者差異不顯著（P>0.05）。 

　　研究者認為：血清中強而等效的抗體水平表明了對照和飼喂益生素組的試驗雞都產(chǎn)生了抗球蟲抗體；試驗開始時，機體獲得的母源抗體不是很高。但是，試驗的結(jié)果并沒有特別的得出以上的兩條結(jié)論中的一條。而且益生素飼喂組雞腸道內(nèi)抗體的低水平（P<0.05）表明測定時該組雞此時需要的抗體分泌量比對照組的低，主要是因為益生素飼喂的雞有很強的能力避免發(fā)生抗體反應(yīng)。 

　　如果這種反應(yīng)發(fā)生，那么γ-干擾素的含量將會比較高，而這種γ-干擾素對于免疫細胞的在某一位置的聚集是發(fā)生重要作用的。然而，試驗的結(jié)果表明兩試驗組之間沒有發(fā)現(xiàn)顯著的不同（P<0.05）。 

　　隨后，在感染后的12天連續(xù)測定了γ-干擾素的量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)飼喂益生素的雞在感染后大約72h其γ-干擾素達到高點，并在隨后的9天內(nèi)從這一個高點直線降低。相反的，對照組的雞其γ-干擾素卻沒有純粹的變化，表明它們不準備或不能進行有效的免疫反應(yīng)。 

　　Dalloul、Lillehoj和Doerr認為：第1個試驗表明了飼喂益生素的雞進行了比對照組的雞更早、更強的抗球蟲的免疫反應(yīng)。因此，體液免疫反應(yīng)沒有什么不同，并且益生素飼喂組的腸道內(nèi)抗體分泌的較低反應(yīng)是與他們最初的假設(shè)相一致的。 

　　通過他們的試驗數(shù)據(jù)可以得出結(jié)論，益生素在禽類生產(chǎn)中可能還有比我們以前想到的還重要的作用。益生素不僅能夠降低胃腸道中的無益微生物的數(shù)量，其在家禽體內(nèi)還具有獨特的外周效應(yīng)，這使得益生素在家禽工業(yè)中的作用更加突出。他們認為，益生素或許能夠提高飼料中關(guān)鍵性營養(yǎng)元素的利用效率，進而具有廣泛的環(huán)境保護效益。然而一些家禽學家認為，益生素還可能對宿主產(chǎn)生一些直接的影響，能夠保存機體的一些資源，從而在機體遭受到外來病原菌侵襲時，能夠產(chǎn)生更為有效的免疫防御作用。